黄曲霉毒素（B1,B2，G1,G2）的高效液相色谱HPLC检测方案

黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 （aspergillus flavus）寄生曲霉 （a.parasiticus）产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率高。B1 、B2和G1、G2，就是经常经常出现在农产品中的黄曲霉毒素的代表，毒性强的排行“B1”，B表示蓝色，因为它在紫外光的照射下会发出蓝色荧光。除了亲兄弟B2之外，它还有堂兄弟G1和G2，因为在紫外光下发射黄绿色荧光而得名。

黄曲霉毒素在农产品中几乎无法避免，不想饿死的人类也只好无奈地吃下一些。世界各国，都只能设定一个“限量标准”。不超过那个标准，危害就小到可以忽略了。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位，是目前已知强致癌物之一。

由于黄曲霉毒素在水溶液中会发生荧光淬灭，反相色谱中B1和G1两种异构体荧光强度很弱，需要进行衍生化。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类，我国药典在测定黄曲霉毒素时采用碘柱后衍生法。

【样品处理过程】

中药：取供试品粉末15g（过二号筛），精密称定，加入氯化钠3g，置于均质瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2min（搅拌速度大于11000r/min），离心5min（离心速度大于2500r/min），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45um）滤过，量取续滤液20ml，待净化；

大米：取样品25g，加入5g氯化钠与125ml提取液（70%甲醇-水溶液）混匀，剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液；取10ml滤液加入20ml蒸馏水稀释，过滤，收集滤液作为上样液，取15ml该溶液待净化；

植物油：取样品25g，加入125ml提取液（80%乙腈-水溶液）混匀，剧烈振荡20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液；取10ml滤液加入40ml蒸馏水稀释，过滤，收集滤液作为上样液，取25ml该溶液待净化；

净化过程需用到黄曲霉免疫亲和柱，净化过程略。

【色谱条件】

色谱柱：C18, 4.6 mm*250 mm，粒度5 µm

流动相:甲醇-乙腈-水=40:18:42

流动相B:将2.2g一水庚烷磺酸钠与6.8g磷酸二氢钾溶于500ml水中，与500ml甲醇混合，PH=3.5；两相混合梯度脱洗；

波长：λex=360nm     λem=450nm 

流速：0.8 mL/min

衍生溶液为0.05%的碘溶液，衍生泵：0.3ml/min, 衍生温度：70℃